EASL2020：DNA

通過(guò)治療性疫苗誘導(dǎo)HBV特異性免疫反應(yīng)是治療慢性HBV感染的一種有前途新療法。德國(guó)研究人員已經(jīng)研制了一種臨床候選治療性乙型肝炎疫苗(TherVacB)，該疫苗基于重組乙肝表面抗原和核心抗原(HBsAg、HBcAg)的兩種蛋白免疫和表達(dá)HBV抗原的改良痘苗病毒安卡拉載體(MVA)的加強(qiáng)免疫。

DNA疫苗可以克服臨床使用的重組蛋白純化復(fù)雜和昂貴的缺點(diǎn)，從而直接在體內(nèi)生產(chǎn)感興趣的抗原。因此，德國(guó)研究人員的目標(biāo)是研制覆蓋最常見(jiàn)的HBV基因型和血清型的DNA疫苗，以拓寬和提高TherVacB誘導(dǎo)的B細(xì)胞和T細(xì)胞免疫應(yīng)答。

研究人員構(gòu)建了編碼A、B/C型HBV小、大包膜蛋白，B/C、D型核心蛋白及HBV逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)結(jié)構(gòu)域的治療性DNA疫苗(DNA-HBVac)。用Westernblotting和ELISA檢測(cè)表達(dá)抗原在體外的穩(wěn)定性和完整性，在C57BL/6小鼠和反映HBV持續(xù)感染的AAV-HBV小鼠模型上檢測(cè)DNA-HBVac的免疫原性。用ELISA和流式細(xì)胞儀檢測(cè)HBV特異性B細(xì)胞和T細(xì)胞應(yīng)答。

體外分析表明，所有DNA-HBVac編碼的HBV蛋白都得到了正確表達(dá)。DNA-HBVac初免和MVA-HBVac增強(qiáng)免疫C57BL/6小鼠安全、耐受性好。與以前的免疫策略相比，該方案導(dǎo)致了非常強(qiáng)的HBV特異性CD8和CD4T細(xì)胞反應(yīng)，但正如預(yù)期的那樣，抗HBs反應(yīng)很低。

在持續(xù)HBV感染模型AAV-HBV轉(zhuǎn)導(dǎo)小鼠中，研究發(fā)現(xiàn)DNA-HBVac在小鼠的肝臟中誘導(dǎo)了強(qiáng)烈的核心、包膜和RT特異性的CD8T細(xì)胞應(yīng)答。此外，在DNA-HBVac疫苗接種期間，觀察到血清ALT顯著升高，這表明肝臟中的細(xì)胞毒性T細(xì)胞活性增加。這些強(qiáng)烈的HBV特異性CD8T細(xì)胞反應(yīng)導(dǎo)致血清HBsAg和HBeAg顯著降低，甚至在一些小鼠中HBV被清除。

該項(xiàng)研究結(jié)果表明，DNA-HBVac可能是一種有希望的替代經(jīng)典的重組蛋白啟動(dòng)的TherVacB方案，這種方案不需要?jiǎng)趧?dòng)密集型和昂貴的重組蛋白純化。（更多肝病新藥研究信息敬請(qǐng)關(guān)注“肝臟時(shí)間”微信公眾號(hào)）！

信息來(lái)源

EASL2020SAT439

MulticistronicDNA-basedtherapeuticvaccineasapromisingcandidatetotreatchronichepatitisBvirus(HBV)infection