HepDART 2019：埃默里大學(xué)更新在研乙肝新藥GLP

目前批準(zhǔn)的抗HBV藥物不能消除感染細(xì)胞中的cccDNA，而一些實驗性衣殼裝配調(diào)節(jié)劑（CAMs）在HBV病毒復(fù)制的幾個步驟中都具有重要影響，包括衣殼裝配，逆轉(zhuǎn)錄，前基因組RNA（pgRNA）和聚合酶蛋白包繞。

在本次HepDART 2019 大會上，埃默里大學(xué)醫(yī)學(xué)院研究人員描述了乙二酰胺衍生物GLP-26在體外和人源化小鼠中誘導(dǎo)抗病毒反應(yīng)的研究結(jié)果。

研究方法

使用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HepAD38細(xì)胞，HepG2- NTCP感染系統(tǒng)和原代人肝細(xì)胞來確定體外結(jié)果。如先前所述，在HUHEP小鼠中進行了體內(nèi)測定(Strick-Marchand H et al., PLoS 2015)。藥物相互作用在HepAD38和HUHEP模型中使用GLP-26聯(lián)合恩替卡韋（ETV）或在PHH中使用GLP-26和TDF進行測定。

病毒學(xué)測量包括：用 TaqMan PCR（qPCR）測量 HBV DNA 擴增或 cccDNA，通過RT-PCR 測量前基因組和表面RNA，以及用 ELISA測量分泌的 HBeAg 或 HBsAg。

還對帶有HBV Cp149二聚體或衣殼樣品進行電子顯微鏡觀察，使用熱移熒光和共聚焦顯微鏡（使用HepAD38細(xì)胞）對帶有HBV Cp149衣殼的樣品進行觀察。在小鼠，大鼠，狗和人血漿中或在小鼠和人肝微粒體中進行穩(wěn)定性測定。通過MTT / MTS分析在幾種細(xì)胞類型中進行細(xì)胞毒性測定，并在HepG2或Huh7細(xì)胞水平使用GSH-GloTM谷胱甘肽分析進行細(xì)胞毒性測定。

研究結(jié)果

GLP-26表現(xiàn)出一位數(shù)的納摩爾抗HBV分泌活性，抑制pgRNA（EC50 = 0.11μM）和HBeAg 產(chǎn)生（EC50 = 0.003μM），并降低cccDNA擴增。令人驚訝的是，在人源化小鼠模型中長期聯(lián)合恩替卡韋治療可導(dǎo)致病毒載量和病毒抗原減少，在治療停止后可維持長達(dá)12周，且無細(xì)胞毒性跡象。

作用機理研究表明，GLP-26 通過抑制 pgRNA衣殼化來加速空衣殼的衣殼組裝動力學(xué)，從而阻止病毒DNA復(fù)制。

這些結(jié)果表明，GLP-26：

1）是體外無毒的 HBV DNA，HBeAg 和 cccDNA產(chǎn)生抑制劑，肝癌細(xì)胞中高達(dá)25μM的 GSH 水平無變化；

2）穩(wěn)定的HBV衣殼顆粒并誘導(dǎo)其在細(xì)胞質(zhì)中的積累；

3）誘導(dǎo)形成堅固的HBV衣殼顆粒；

4）能使感染HBV的人源化小鼠 HBV DNA ，HBsAg 和 HBeAg 水平降低；

5）與ETV聯(lián)合用藥具有協(xié)同作用，在感染HBV的人源化小鼠中具有長期持續(xù)的治療后減少病毒DNA和抗原的作用；

6）在小鼠和食蟹猴中具有良好的體外和體內(nèi)藥代動力學(xué)特征。

總而言之，與GLP-26的聯(lián)合用藥可能代表了一種可阻止 cccDNA 形成的HBV功能性治愈或滅菌性治療。（更多肝病新藥研究信息敬請關(guān)注“肝臟時間”微信公眾號）！